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为了验证上述三个基因对多年生以及生活史策略的影响,使用CRISPR/Cas9基因组编辑技术定向敲除多年生喜马拉雅须弥芥中的FLC、FLM和MAF基因,通过杂交手段将突变基因以不同的方式组合,成功再现了植物从多次结实多年生逐渐演化为二年生再转变为一年生的轨迹:当FLC、FLM和MAF三个基因都保持功能完好时,植物表现出稳健的多次结实多年生表型;缺失其中一个或两个基因会导致植物出现兼性生活史策略;而当三个基因完全缺失时,植物转变为一次结实一年生。

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通过对亲本和F1代植物的RNA-seq和H3K27me3 ChIP-seq实验,发现一年生小花糖芥的FLC类MADS-box基因在春化后更倾向于被稳定抑制,而来自多年生内华达糖芥的基因在春化后则倾向于重置,这一差异是多次结实多年生植物生活习性建立的核心分子基础,并由基因自身的特异序列所决定。研究发现,尽管FLC、FLM和MAF亲缘关系较近,但是它们在基因功能与表达量以及重置时间与强度上都不尽相同。

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